Page 111 - เอกสารประกอบการประชุมวิชาการกรมพัฒนาที่ดิน ปี2560 วิชาการงานพัฒนาที่ดิน ขับเคลื่อนคุณภาพชีวิตเกษตรกรสู่ความยั่งยืน : ระหว่างวันที่ 19-21 กรกฎาคม 2560 ณ โรงแรมสยามออเรียนทัล อำเภอหาดใหญ่ จังหวัดสงขลา

ห้องสมุดกรมพัฒนาที่ดิน

ประชุมวิชาการกรมพัฒนาที่ดิน ปี 2560 “วิชาการงานพัฒนาที่ดิน ขับเคลื่อนคุณภาพชีวิตเกษตรกรสู่ความยั่งยืน” วันที่ 19 - 21 กรกฎาคม 2560

5.2 ท าสารละลายสปอร์ (spore suspension) โดยการขูดสปอร์มาละลายในน้ ากลั่นที่ฆ่าเชื้อแล้ว
8
7
5
6
ปรับให้มีความเข้มข้นที่ 0 1x10 1x10 1x10 และ 1x10 สปอร์ต่อมิลลิลิตร
5.3 ปลูกข้าวในถ้วยพลาสติก ขนาดเส้นผ่าศูนย์กลาง 3 เซนติเมตร สูง 2 เซนติเมตร เมื่อข้าวอายุ
ประมาณ 7 วัน น ามาใส่กระบอกพลาสติกทรงสูงขนาดเส้นผ่าศูนย์กลาง 5 เซนติเมตร สูง 25 เซนติเมตร
5.4.ใส่เพลี้ยกระโดดสีน้ าตาลวัย 3 ลงในกระบอกพลาสติกกระบอกละ 5 ตัว สเปรย์สารละลายสปอร์

ความเข้มข้นละ 3 ซ้ า ปิดด้วยผ้าขาวบาง
5.5 ตรวจผลวันที่ 3 5 7 และ 9 หลังจากสเปรย์สารละลายสปอร์ นับจ านวนและบันทึกจ านวน

เพลี้ยกระโดดที่ตาย แล้วน ามาล้างด้วย sodium hypochloride 0.1 % 2 ครั้ง และล้างน้ ากลั่นที่ฆ่าเชื้อแล้ว

1 ครั้ง ผึ่งให้แห้ง แล้วน ามาวางบนอาหาร PDA
5.6 นับ และบันทึกจ านวนซากเพลี้ยกระโดดสีน้ าตาลที่มีเชื้อราเอนโดไฟต์เจริญ

5.7 ค านวณ % mortality และหาค่า Lethal Concentration (LC50) โดยใช้โปรแกรม Probit

Analysis (Finney, 1952 ; Hayes et al., 2014)

6. การศึกษาอาหารเลี้ยงเชื้อที่เหมาะสมต่อการเจริญและเพิ่มปริมาณของจุลินทรีย์ endophytic fungi

สูตรอาหารประกอบด้วย
Potato Dextrose Agar (PDA)

Malt Extract Agar (MEA)

Sabouraud’s Dextrose Agar (SDA)
Czapek Dextrose Agar (CDA)

6.1 เพาะเลี้ยงเชื้อราในอาหารแข็ง PDA เก็บไว้ที่อุณหภูมิห้อง เป็นเวลา 13 วัน
6.2 บันทึกลักษณะการเจริญของจุลินทรีย์ ระยะเวลาการเจริญของเส้นใย โดยการวัดขนาด

เส้นผ่าศูนย์กลางของโคโลนี วันที่ 3 5 7 9 11 และ 13

ผลการทดลองและวิจารณ์

1. การเก็บตัวอย่างเชื้อ endophytic fungi การคัดเลือก และการจ าแนกชนิด
จากการเก็บตัวอย่างดินเพื่อคัดแยกเชื้อราเอนโดไฟต์ จากตัวอย่างดินบริเวณรอบต้นข้าว ไม้ยืนต้น ไม้

ผล และพืชสมุนไพร และจากตัวอย่างพืช ได้แก่ ใบ ล าต้น และรากข้าว ที่สถานีพัฒนาที่ดิน จังหวัดอุทัยธานี
และ บ้านป่าอ้อ ต าบลป่าอ้อ อ าเภอลานสัก จังหวัดอุทัยธานี รวมทั้งหมดจ านวน 50 ตัวอย่าง จากนั้นน ามา

แยก endophytic fungi จากอย่างดินโดยวิธี dilution plate count และตัวอย่างพืชด้วยวิธี triple surface

sterilization ได้เชื้อราทั้งหมดจ านวน 12 ไอโซเลต จากนั้นน าเชื้อราทั้ง 12 ไอโซเลตมาท าให้บริสุทธิ์และ
เพาะเลี้ยงในอาหาร PDA เชื้อราที่สามารถเจริญได้มีจ านวน 4 ไอโซเลต ได้แก่ รหัสตัวอย่าง P11 P13 G12

และ W12

88