Page 18 - การศึกษาองค์ประกอบทางเคมีสายพันธุ์หญ้าแฝกหอม และพัฒนาต้นแบบผลิตภัณฑ์สารสกัดจาก

ห้องสมุดกรมพัฒนาที่ดิน

ปຂ฼ปต༛sample༛20༛ul༛ตามดຌวย༛10%Folin-Ciocalteau༛reagent༛100༛ul༛฽ละ༛Na 2CO 3༛80༛ul༛

ลง฿น༛microtiter༛96-well༛plate༛ผสมสารละลาย฼ขຌากัน฽ลຌว༛฼กใบเวຌ฿นทีไมืด฼ปຓน฼วลา༛60༛นาที༛

-༛༛วัดค຋าการดูดกลืน฽สงทีไ༛765༛nm༛ดຌวย฼ครืไอง༛microplate༛reader༛
-༛วัดค຋าการดูดกลืน฽สงนำมาคำนวณหาปริมาณ༛Total༛phenolic༛content༛฼ปຓน༛Gallic༛acid༛
Equivalents༛(GAE)༛

3.2 การศึกษาปริมาณ༛Total༛polysaccharide༛content༛
-༛สารละลายมาตราฐานกลู฾คส༛฼ตรียม฿หຌมีความ฼ขຌมขຌน༛10-200༛µg/ml༛฼พืไอนำมา฿ชຌสรຌางกราฟ

มาตราฐาน༛༛
-༛฼ตรียม༛Phenol༛฿หຌมีความ฼ขຌมขຌน༛5%Phenol༛༛

-༛สารสกัดหญຌา฽ฝกนำมา฼จือจางดຌวยนๅำ฿หຌมีความ฼ขຌมขຌน༛1༛mg/ml༛
-༛การทดสอบหาปริมาณ༛Total༛polysaccharides༛contents༛༛

ปຂ฼ปต༛sample༛200༛ul༛ตามดຌวย༛5%Phenol༛200༛ul༛฽ละ༛conc.༛H 2SO 4༛1༛ml༛฼ขย຋า฿หຌ฼ขຌากัน༛
ตัๅงทิๅง฿หຌ฼ยใน฿นอุณหภูมิหຌอง༛15༛นาที༛༛༛

-ปຂ฼ปตลง฿น༛microtiter༛96-well༛plate༛วัดค຋าการดูดกลืน฽สงทีไ༛490༛nm༛ดຌวย฼ครืไอง༛
microplate༛reader༛

-༛การคำนวณหาปริมาณ༛Total༛polysaccharides༛contents༛จากสมการ฼สຌนตรงทีไเดຌจาก
กราฟมาตรฐาน༛

4.༛༛การศึกษาลายพิมพຏทาง฼คมีของสารสกัดหญຌา฽ฝกหอม༛
4.1.༛Thin༛Layer༛Chromatography༛(TLC)༛
-༛฼ตรียมวัฏภาคคงทีไ༛คือ฽ผ຋นที฽อลซีสำ฼รใจรูป༛(silica༛gel༛GF 254)༛ขนาด༛10༛x༛10༛฼ซนติ฼มตร༛

-༛฼ตรียมสารตรฐาน༛p-coumaric༛acid༛฽ละ༛ferulic༛acid༛1༛mg/ml༛หยดสารมาตรฐานลงบน
฽ผ຋น༛TLC༛ปริมาตร༛5༛ul/spot༛

-༛฼ตรียมสารตัวอย຋างหญຌา฽ฝกหอมสายพันธุຏต຋างโ༛ความ฼ขຌมขຌน༛5༛mg/ml༛หยดสารสกัดลงบน
฽ผ຋น༛TLC༛ปริมาตร༛10༛µL/spot༛༛༛
-༛พัฒนา฽ผ຋น༛TLC༛฾ดย฿ชຌ༛mobile༛phase༛ต຋างโ༛฼พืไอหาสภาวะทีไดีทีไสุดทีไทำ฿หຌ฼กิดการ฽ยกของ

สารตัวอย຋าง༛༛

༛Mobile༛phase༛A:༛CHCl 3༛:༛Ethyl༛acetate༛:༛Acetic༛acid༛(50:50:1)༛༛
༛Mobile༛phase༛B:༛Hexane༛:༛Ethyl༛acetate༛:༛Formic༛acid༛(20:19:1)༛
-༛ตรวจสอบ฽ผ຋น༛TLC༛ภาย฿ตຌ༛UV༛ทีไความยาวคลืไน༛254༛฽ละ༛365༛นา฾น฼มตร༛

-༛ตรวจสอบดຌวยนๅำยาพ຋น༛20%༛H 2SO 4༛หลังจากพ຋น฽ลຌวนำอบทีไ༛105༛°C༛฼ปຓน฼วลา༛10-15༛นาที༛༛
-༛ประ฼มินผลของที฽อลซี฾ครมา฾ท฽กรม฾ดยคำนวณจากค຋า༛R f༛จำนวน฽ถบสาร༛ความ฼ขຌมของ

฽ถบสาร༛฽ละสีของ฽ถบสาร༛

18

༛