Page 36 - การศึกษาระบบการผลิตต้นหญ้าแฝกหอมในระดับอุตสาหกรรมด้วยไบโอรีแอคเตอร์จมชั่วคราว

ห้องสมุดกรมพัฒนาที่ดิน

21

2. กรณีของ฼ชืๅอ฽บคที฼รีย฿ชຌห຋วงถ຋าย฼ชืๅอ༛นำ฽บคที฼รียจากบริ฼วณทีไพบการปน฼ป຅ຕอน༛มาขีดบนผิวหนຌา
อาหาร༛Tryptic༛soy༛agar༛(TSA;༛Himedia,༛India)༛restreak༛2-3༛ครัๅง จนเดຌ฼ชืๅอบริสุทธิ่༛฼พิไมจำนวน฼ชืๅอ฿น

อาหาร༛tryptic soy broth (TSB) ฼พืไอ฼กใบ฿น༛glycerol༛20%༛ทีไอุณหภูมิ༛-20༛องศา฼ซล฼ซียส༛฽ละ฿ชຌสำหรับการ

จำ฽นกชนิดของ฼ชืๅอ฽บคที฼รีย฾ดย฼ทคนิคทางอณูชีววิทยา

3. การ฽ยก฼ชืๅอรา༛฽ละยีสตຏ฿ชຌอาหาร༛streptomycin rose Bengal agar (SRA) ฾ดย฽ตะชิๅนส຋วนทีไมีการ

ปน฼ป຅ຕอน༛มาวางบนอาหาร༛SRA ฼พืไอ฽ยก฼ชืๅอรา༛฽ละ༛streak༛บนอาหาร฼พืไอ฽ยกยีสตຏ༛ทำ฼ชืๅอรา฿หຌบริสุทธิ่฾ดย
การตัดปลาย฼สຌน฿ยถ຋ายจนเดຌ฼ชืๅอบริสุทธิ่༛กรณีของยีสตຏ฼พาะ฼ลีๅยง฿นอาหาร༛yeast extract potato dextrose

(YPD) broth ฼กใบ฼สຌน฿ย฼ชืๅอรา ฽ละยีสตຏ฿น༛glycerol༛20%༛ทีไอุณหภูมิ༛-20༛องศา฼ซล฼ซียส༛฽ละ฿ชຌสำหรับการ

จำ฽นกชนิดของ฼ชืๅอรา ฽ละยีสตຏ฾ดย฼ทคนิคทางอณูชีววิทยา

4. การจำ฽นกชนิดของ฽บคที฼รีย฼บืๅองตຌน฾ดยการยຌอมสี฽บบ฽กรม༛฼พืไอดูรูปร຋าง฽ละการติดสียຌอม༛จากนัๅนนำ
฼ชืๅอ฽บคที฼รียทีไตຌองการจำ฽นกมา฼พาะ฼ลีๅยง฿นอาหาร༛TSB นาน༛18-24༛ชัไว฾มง༛ปຑດน฼หวีไยงทีไความ฼รใว༛12,000༛รอบต຋อ

นาที༛นำตะกอน฼ซลลຏมาสกัดดี฼อใน฼อดຌวยชุดสกัด TIANamp Bacteria DNA Kit (TIANGEN Biotech (Beijing)

Co.,Ltd,༛China) นำดี฼อใน฼อมา฼พิไมปริมาณบริ฼วณ༛16S rRNA ดຌวย༛polymerase chain reaction ฾ดย฿ชຌเพร฼มอรຏ༛
27F (5´-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3´)༛฽ละ༛1492R (5´-TACGGYTACCTTGTTACGACTT-3´) (Firstbase,༛

Malaysia) ฿ ช ຌ ช ุ ด ༛ purify PCR products ฾ ด ย ฿ ช ຌ ช ุ ด ส ำ ฼ ร ใ จ ร ู ป TIANquick༛Midi༛Purification༛Kit
ส຋งผลผลิตพีซีอารຏทีไเดຌเปหาลำดับ฼บสทีไ༛บริษัท༛ATCG༛Co.,༛Ltd.༛นำลำดับ฼บสทีไเดຌ฿ส຋฾ปร฽กรม༛BLAST ฿นฐานขຌอมูล

GenBank༛ของ༛National Center for Biotechnology Information (NCBI) ฼พืไอระบุชนิดของ฽บคที฼รีย

5. การจำ฽นกชนิดของ฼ชืๅอรา༛฽ละยีสตຏ༛฼ลือก฾ค฾ลนีทีไมีลักษณะต຋างโ༛กัน༛มาศึกษาลักษณะภาย฿ตຌกลຌอง
จุลทรรศนຏ฾ดยการทำ༛slide culture ฽ละ༛mount slide ดຌวย༛lactophenol cotton blue ฼ปรียบ฼ทียบลักษณะ

ของสปอรຏ༛฽ละ฼สຌน฿ยของ฼ชืๅอรา฼บืๅองตຌน฾ดย฼ปรียบ฼ทียบกับ༛Pepper and Gerba (2004)༛สำหรับการจำ฽นก

฼ชืๅอราดຌวย฼ทคนิคอณูชีววิทยา༛ดຌวยการ฼ลีๅยงราบนอาหาร༛PDA ฼มืไอรา฼จริญ฼ตใมทีไจึง฼ขีไย฼อา฼สຌน฿ย
หรือสปอรຏมาสกัด฽ยกดี฼อใน฼อดຌวยวิธีชุดสกัดสำ฼รใจรูปของ༛Quick-DNA Fungal/Bacterial Kits (Zymoresearch,༛

USA) ฼พิไมชิๅนส຋วนเอที฼อส༛(ITS,༛internal༛transcribed༛spacers)༛บริ฼วณ༛ITS1-5.8S-ITS2༛ของยีน༛rDNA ฿นราทีไ฽ยก

เดຌ༛฾ดย฿ชຌเพร฼มอรຏ༛ITS1༛(5´-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3´)༛฽ละ༛ITS4 (5´-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3´)༛
(White et al.,1990)༛นำส຋งผลผลิตพีซีอารຏทีไเดຌมาทำ฿หຌบริสุทธิ่༛฽ละส຋งเปหาลำดับ฼บส༛฼ช຋น฼ดียวกับการหาชนิดของ

฽บคที฼รีย

3.2 ระบุชนิดของ฼ชืๅอจุลินทรียຏดຌวย฼ทคนิคทางอณูวิทยา

3.3 สรุปขຌอมูล༛วิ฼คราะหຏ฽หล຋งทีไมา฽ละจุด฼สีไยง฿นการปน฼ป຅ຕอน฼ชืๅอจุลินทรียຏ